转基因玉米能化验出吗

　　随着转基因大豆、马铃薯、油菜等许多转基因作物走进人们的生活，转基因玉米也进入人们的视野。与其相关的问题也比比皆是，如转基因玉米能化验出吗?转基因玉米能吃吗?转基因玉米怎么判断?等等。今天本站小编就来和大家说说转基因玉米化验的相关知识，让我们一起来看看吧!
　　首先，小编在这里告诉大家转基因玉米是能化验出的，具体检测步骤如下：
　　1.模板DNA提取
　　称取2g粉样于10mL离心管中，加入5mL CTAB裂解液（含适量RNA酶），混匀60℃水浴振荡保温1h；2000r/min离心5min；取上清液，加等体积三氯甲烷一异戊醇（24：1）混匀，静置5min，8000r/min离心5min；小心取离心上清液，再加等体积三氯甲烷一异戊醇 （24：1）混匀，静置5min，8000r/min离心5min；取离心上清液加0.65倍体积的异丙醇。 混匀，12000r/min 4℃离心5min；弃上清液，加500μL 70%冰乙醇洗涤一次，12000r/min4℃离心5min；弃上清液，将沉淀晾干，加入50μL TE，溶解沉淀（4℃过夜，或37℃保温1h）；此即为总DNA提取液。也可用相应的市售DNA提取试剂盒提取DNA。
　　2.PCR定性检测
　　（1）PCR反应体系。检测转基因玉米中内源基因和外源基因的PCR反应体系。
　　每个反应体系应设置两个平行反应。以转基因玉米或已知相应阳性质粒作为阳性对照，非转基因玉米作为阴性对照，以水代替模板DNA作为空白对照。
　　（2）PCR反应循环参数。94℃预变性2min，94℃变性40s，55～58℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环。72℃延伸5min。4℃保存。也可根据不同的基因扩增仪对PCR反应循环参数做适当调整。
　　（3）PCR扩增产物电泳检测。用电泳缓冲液（1×TBE或TAE）制备2%琼脂糖凝胶（其中在55～60℃加入EB或其他染色剂至终浓度为0.5μg/μL，也可在电泳后进行染色）。将10～15μL PCR扩增产物分别和2μL上样缓冲液混合，进行点样。用100bp梯带DNA标记物（Ladder DNA Marker）或相应合适的DNA标记物（DNA Marker）作分子量标记。3～5V/cm恒压，电泳20～40min。凝胶成像仪观察并分析记录。
　　（4）结果判断
　　①内源基因的检测用针对玉米内源的IVR基因（或Zein基因）设计的引物对玉米DNA提取液进行PCR测试，阴性对照、阳性对照和待测样品均应被扩增出226bp（或173bp）的PCR产物。如未见有该PCR产物扩增，则说明DNA提取质量有问题，或DNA提取液中有抑制PCR反应的因子存在，应重新提取DNA，直到扩增出该PCR产物。
　　②外源基因的检测对玉米样品DNA提取液进行外源基因的PCR测试，如果阴性对照和空白对照未出现扩增条带，阳性对照和待测样品均出现预期大小的扩增条带扩增片段长度，则可初步判定待测样品中含有可疑的该外源基因，应进一步进行确证试验，依据确证试验的结果做最终报告；如果待测样品中未出现PCR扩增产物，则可断定待测样品中不含有该外源基因。
　　③筛选检测和鉴定检测的选择对玉米样品中转基因成分的检测，可先筛选检测CaMV35S、NOS、NPT、PAT、BAR基因，筛选检测结果阴性则直接报告结果。
　　若筛选检测结果阳性，则需进一步鉴定检测IVS2/PAT、Maize genome/CaMV35S、HSP70/CryIAb、CDPK/CrylAb、CaMV 35S/PAT、PAT/CaMV 5S、CaMV 35S/Cry9C、Cry9C/CaMV35S、PactinI/mEPSPS、OTP/mEPSPS基因，以确定是何种转基因玉米品系。
　　（5）确证试验样品检测为阳性结果时需要用实时荧光PCR来确证。
　　以上是关于转基因玉米能化验及相关知识的介绍，希望能给大家带来帮助。如果想了解更多的转基因食品安全知识与食品安全小知识，请您时刻关注本站。