石蜡包埋（石蜡切片免疫组化） 1、组织的采集、固定和保存： 采取组织后， 方法一：4%多聚甲醛（4%PFA）4°C 固定1小时（根据组织大小和致密程度调整固定时间）或过夜 方法二：采用bouin’s固定RT 2h（6-8d tesis）or RT 过夜（成年 tesis） PBS缓冲液洗三次，每次5min，4°C保存于70%乙醇中。 2、组织的包埋、切片、展片及保存：： 固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，52-54°C石蜡包埋，常规切片，切片厚4 -10mm，贴于处理过的干净载玻片上，37°C烤片过夜，之后收集于载片盒中，RT密封保存。 石蜡包埋： 保存于4°C 70%乙醇中的组织样品 ¯ 80%乙醇 15 min ¯ 95%乙醇 15 min ¯ 100%乙醇 15min ´ 2 ¯ 1/2乙醇1/2二甲苯 15 min ¯ 二甲苯透明 5-10 min ¯ 1/2二甲苯1/2石蜡 30 min ¯ 石蜡（1） 1.5hr ¯ 石蜡（2） 1.5-2.5hr ¯ 石蜡（3） 包埋 ¯ RT保存 3、石蜡组织切片的免疫组化方法： 密封保存于RT的组织切片 ¯ 二甲苯(1) 20 min ¯ 二甲苯(2) 20 min ¯ 100%乙醇 20min ¯ 95%乙醇 10 min ¯ 80%乙醇 10 min ¯ 通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈 ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*2 ¯ 0.4%Tritonx RT 10 min ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*3 3%H2O2 RT10min 切片在PBS中浸泡 5 min*3 0.25%胰酶RT10min 切片在PBS中浸泡 5 min*3 Blocking buffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS)RT 60min 倾去blocking buffer，勿洗 一抗4°C overnight in blocking buffer 取出切片复温1h，切片在PBS中浸泡 5 min*3 二抗in blocking buffer GAR1：200 （GAM1：100），RT 1h 切片在PBS中浸泡 5 min*3 DAB显色5-10min（50微升A+50微升B+900微升PBS+5微升3%H2O2） 如果是增强型DAB只要1min即可。 切片浸入PBS终止显色，HE衬染1s， 玻片架放入泡沫盒，流水冲洗15min，肉眼看到淡淡的紫色即可停止。 若颜色太深，可用0.1-0.5%盐酸乙醇分色1～2秒钟（或更久） 脱水85%乙醇 5 min ¯ 95%乙醇 5 min ¯ 无水乙醇 5 min ¯ 无水乙醇 5min ¯ 二甲苯(1) 10min ¯ 二甲苯(2) 10min ¯ 中性树胶封片，室温干燥保存 4、石蜡组织切片的免疫荧光方法： 密封保存于RT的组织切片 ¯ 二甲苯(1) 20 min ¯ 二甲苯(2) 20 min ¯ 100%乙醇 20min ¯ 95%乙醇 10 min ¯ 80%乙醇 10 min ¯ 通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈 ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*2 ¯ 0.4%Tritonx RT 10 min ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*3 切片在PBS中浸泡 5 min*3 0.25%胰酶RT10min 切片在PBS中浸泡 5 min*3 Blocking buffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS)RT 60min 倾去blocking buffer，勿洗 一抗4°C overnight in blocking buffer 取出切片复温1h，切片在PBS中浸泡 5 min*3 荧光二抗in blocking buffer GAR-cy3 1：1000，GAM-488 1：1000RT 1h DAPI（1：1000请根据二抗说明稀释二抗） 切片在PBS中浸泡 5 min*3
怎么查老婆删除掉的微信聊天记录，今日恢复方法分享1如何查看老婆删除的微信聊天记录，今日专家推荐老婆删除的微信记录如何恢复？2如何查看老婆删除的微信聊天记录，今日专家推荐查看老婆删除的微信聊天记录查看老婆删除的微信聊天记录具体步骤老婆出轨怎么查微信聊天记录，需要使用什么软件1女方通过什么方式取证出轨，如何取证？2老婆出轨怎么查微信聊天记录软件，调查微信聊天记录软件我老婆的微信能被监控H2gt3如何查看手机删除的微信聊天记录？第二步在功能百科界面，找到淮山炖多久（淮山药要煮多久才熟）大家好，这里是刘一手美食，老刘，每天分享一道好吃又实用的家常菜1玉米排骨汤是一道食补汤品，主要食材是玉米和排骨，主要烹饪工艺是炖2今天刘嫂就来分享一下山药玉米炖排骨做法，喜欢的朋友菠萝多久成熟（菠萝啥时候成熟）菠萝是很多人都爱吃的一种水果，但在市场上买的菠萝如果回家不用盐水浸泡一下就会有点酸涩对口腔的刺激比较大，而用盐水浸泡过的菠萝，甜度和口感反而会上升，那么菠萝是什么季节的水果？菠萝出脚扭伤冷敷多久（脚踝扭伤了冷敷多久）点击上方健康第一线，守护家人健康！导语超级寒潮横扫全国，各地人民正经历入冬以来最冷的时期。话说，寒冷的环境可以使人变得年轻小明的爷爷今年70多岁，出门冻得跟孙子一样年轻是好，可这天深圳安居房轮候要多久（深圳安居房排名14万要等多久）01hr官网查询排名链接httpzjj。sz。gov。cnbsfwzdyw1zfbzjggsindex。html今天深圳安居房轮候库更新了，46月申请加入安居房轮候库的家庭正式加入麻药多久可以怀孕（麻药对怀孕有影响吗）来源江苏省人医生殖中心麻醉之所以可以消除疼痛，在于麻醉药阻断了痛觉的信号传输，大脑接受不到痛的信号，这样我们全身都感觉不到疼痛。很多人手术后醒来，觉得思维混沌，所以常常会担心麻醉会疤痕多久变软（增生疤痕变软是不是快好了）疤痕是创伤愈合留下的痕迹，也是组织修复愈合的最终结果。在某些个体，修复过程发生异常可以导致组织过度增生而形成增生性疤痕。增生性疤痕突出皮面，形状不规则，高低不平，潮红充血，质地实韧药流后多久清宫（药流后清宫手术要多长时间）石狮现代医院妇科医生为大家解答！流产药物分为两种，一般情况下，服用第二种之后，孕囊多需要二至六小时可以排出的，少数人一周内可以排出孕囊，孕囊排出之后，出血量会越来越少的，多不超过七胫腓骨骨折多久能恢复（胫腓骨骨折5个月）一般来说，骨折在接受手术以后，会自动愈合。但也会有骨不连的情况发生后台有朋友私信，询问骨折以后愈合的问题。之前也有写过一篇文章，专门介绍骨不连，也就是骨折以后长久不愈合，或是愈合缓中专升大专需要什么条件（中专升大专考什么范围）在找工作时，我们发现大多职位都要求专科及以上学历，因此作为中专学历的同学，很难找到一份像样的工作，所以提升学历迫在眉睫。那么中专升大专怎么升？下面小编为大家详细介绍。首先中专升大专