石蜡包埋（石蜡切片免疫组化） 1、组织的采集、固定和保存： 采取组织后， 方法一：4%多聚甲醛（4%PFA）4°C 固定1小时（根据组织大小和致密程度调整固定时间）或过夜 方法二：采用bouin’s固定RT 2h（6-8d tesis）or RT 过夜（成年 tesis） PBS缓冲液洗三次，每次5min，4°C保存于70%乙醇中。 2、组织的包埋、切片、展片及保存：： 固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，52-54°C石蜡包埋，常规切片，切片厚4 -10mm，贴于处理过的干净载玻片上，37°C烤片过夜，之后收集于载片盒中，RT密封保存。 石蜡包埋： 保存于4°C 70%乙醇中的组织样品 ¯ 80%乙醇 15 min ¯ 95%乙醇 15 min ¯ 100%乙醇 15min ´ 2 ¯ 1/2乙醇1/2二甲苯 15 min ¯ 二甲苯透明 5-10 min ¯ 1/2二甲苯1/2石蜡 30 min ¯ 石蜡（1） 1.5hr ¯ 石蜡（2） 1.5-2.5hr ¯ 石蜡（3） 包埋 ¯ RT保存 3、石蜡组织切片的免疫组化方法： 密封保存于RT的组织切片 ¯ 二甲苯(1) 20 min ¯ 二甲苯(2) 20 min ¯ 100%乙醇 20min ¯ 95%乙醇 10 min ¯ 80%乙醇 10 min ¯ 通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈 ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*2 ¯ 0.4%Tritonx RT 10 min ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*3 3%H2O2 RT10min 切片在PBS中浸泡 5 min*3 0.25%胰酶RT10min 切片在PBS中浸泡 5 min*3 Blocking buffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS)RT 60min 倾去blocking buffer，勿洗 一抗4°C overnight in blocking buffer 取出切片复温1h，切片在PBS中浸泡 5 min*3 二抗in blocking buffer GAR1：200 （GAM1：100），RT 1h 切片在PBS中浸泡 5 min*3 DAB显色5-10min（50微升A+50微升B+900微升PBS+5微升3%H2O2） 如果是增强型DAB只要1min即可。 切片浸入PBS终止显色，HE衬染1s， 玻片架放入泡沫盒，流水冲洗15min，肉眼看到淡淡的紫色即可停止。 若颜色太深，可用0.1-0.5%盐酸乙醇分色1～2秒钟（或更久） 脱水85%乙醇 5 min ¯ 95%乙醇 5 min ¯ 无水乙醇 5 min ¯ 无水乙醇 5min ¯ 二甲苯(1) 10min ¯ 二甲苯(2) 10min ¯ 中性树胶封片，室温干燥保存 4、石蜡组织切片的免疫荧光方法： 密封保存于RT的组织切片 ¯ 二甲苯(1) 20 min ¯ 二甲苯(2) 20 min ¯ 100%乙醇 20min ¯ 95%乙醇 10 min ¯ 80%乙醇 10 min ¯ 通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈 ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*2 ¯ 0.4%Tritonx RT 10 min ¯ 切片在PBS中浸泡 5 min*3 切片在PBS中浸泡 5 min*3 0.25%胰酶RT10min 切片在PBS中浸泡 5 min*3 Blocking buffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS)RT 60min 倾去blocking buffer，勿洗 一抗4°C overnight in blocking buffer 取出切片复温1h，切片在PBS中浸泡 5 min*3 荧光二抗in blocking buffer GAR-cy3 1：1000，GAM-488 1：1000RT 1h DAPI（1：1000请根据二抗说明稀释二抗） 切片在PBS中浸泡 5 min*3
洛书九宫图（河图洛书与八卦）洛书九宫图（河图洛书与八卦）远古伏羲时代，有龙马从河水中浮出，背上有神奇的五十五个黑白点排成的图案，单数为白点为阳，双数为黑点为阴，河图用十个黑白园点表示阴阳五行四象，其图为四方形鱼钩型号（鱼钩型号大小对比表）鱼钩型号（鱼钩型号大小对比表）鱼钩虽然小而简单，其在钓鱼过程中起的作用是非常重要的，选择好正确的鱼钩才能有更好的鱼获！即所谓钓什么鱼用什么钩。由于鱼钩种类型号比较多，下面小编就对各北京二日游最佳攻略（北京2日游攻略和景点）北京二日游最佳攻略（北京2日游攻略和景点）我把我和父母的北京之旅行程分享给你，希望能帮到你，给你一点北京2日游攻略和景点，北京纯玩二日游攻略参考北京2日游攻略和景点，北京两天时间适上海二日游攻略（上海最好的两天游路线！）上海二日游攻略（上海最好的两天游路线）上海最好的路线和景点登东方明珠塔，鸟瞰上海在黄浦江上乘坐豪华游轮，玫瑰公主或强生号推荐城隍庙的南翔小笼包七宝古镇世界巧克力梦乐园，强烈推荐这个大理自助游（大理3天2晚自由行超详细攻略）大理自助游（大理3天2晚自由行超详细攻略）不管什么原因，我觉得来大理的出行方式最好是自由行或者包车玩，跟团游的都是走马观花，还会被拉去购物，那样就失去了旅行的意义，以下给大家分享大南华真经（南华真经注疏）南华真经（南华真经注疏）此南华真经注疏集西晋郭象的庄子注和唐代成玄英的疏为一书。全书分内篇外篇杂篇三部分，存三十三篇。现有清光绪时期遵义黎庶昌日本东京使署景宋刊（十卷）本及日本室町生活知识科普花露水对眼睛有影响吗在我们的生活当中有很多的常识性的知识大多数人都是不知道的，就好比最近就有很多小伙伴咨询小编问小编关于花露水对眼睛有影响吗的这些知识点，这就说明了现在人们也开开渐渐关注起了花露水对眼生活知识科普投影仪对眼睛有害吗在我们的生活当中有很多的常识性的知识大多数人都是不知道的，就好比最近就有很多小伙伴咨询小编问小编关于投影仪对眼睛有害吗的这些知识点，这就说明了现在人们也开开渐渐关注起了投影仪对眼睛生活知识科普柴油弄到眼睛里有事吗在我们的生活当中有很多的常识性的知识大多数人都是不知道的，就好比最近就有很多小伙伴咨询小编问小编关于柴油弄到眼睛里有事吗的这些知识点，这就说明了现在人们也开开渐渐关注起了柴油弄到眼生活知识科普柴油弄眼睛里有影响吗在我们的生活当中有很多的常识性的知识大多数人都是不知道的，就好比最近就有很多小伙伴咨询小编问小编关于柴油弄眼睛里有影响吗的这些知识点，这就说明了现在人们也开开渐渐关注起了柴油弄眼睛单反入门推荐（高性能亦有性价比入门级单反相机推荐）单反入门推荐（高性能亦有性价比入门级单反相机推荐）虽然目前单电大底便携相机层出不穷，但是入门级单反依然在摄影爱好者心中拥有牢不可破的地位。对于喜爱摄影的初学者来说，无论从性能还是镜